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Tipo de material : bachelorThesis
Título : Identificación de especies de Leishmania, a partir de muestras de pacientes infectados con leishmaniasis
Autor : Muñoz Salazar, Erika Belen
Tutor : Baldeón Tixe, Manuel Eduardo
Palabras clave : PARASITOLOGÍA;LEISHMANIOSIS;CULTIVO PROTOZOARIO
Fecha de publicación : 2015
Editorial : Quito: Universidad de las Américas, 2015.
Citación : Muñoz Salazar, Erika Belen (2015). Identificación de especies de Leishmania, a partir de muestras de pacientes infectados con leishmaniasis. Facultad de Ingenierías y Ciencias Agropecuarias. UDLA. Quito. 97 p.
Resumen : La Leishmaniasis es una parasitosis causada por protozoarios del género Leishmania, que se manifiesta en forma cutánea, mucocutánea o visceral, según la especie del parásito. En el Ecuador se han reportado siete especies causantes únicamente de las formas cutánea y mucocutánea: L. amazonensis, L. braziliensis, L. guyanensis, L. major-like, L. mexicana, L. naiffi y L. panamensis. Para el diagnóstico e identificación del parásito se han desarrollado varias técnicas moleculares basadas en la PCR y secuenciación de diferentes genes. En la presente investigación se identificó Leishmania a nivel de especie en muestras de pacientes infectados con Leishmaniasis, mediante la amplificación del gen codificante para el 18S rRNA y posterior amplificación y secuenciación del gen que codifica para el citocromo b. Se incluyó a 35 pacientes, reclutados en Santo Domingo (n=13), Pedro Vicente Maldonado (n=11) y el Hospital de Especialidades de las Fuerzas Armadas (n=11). De los 13 primeros pacientes se obtuvieron únicamente muestras por aspirado de la lesión, destinadas a cultivo, pero estos presentaron contaminación y no fueron analizados por métodos moleculares. En los 22 pacientes restantes se recolectaron 2 muestras adicionales, una por raspado de la lesión y otra de sangre periférica. De estos pacientes, solo 5 fueron mujeres; 9 aún no habían empezado tratamiento con Glucantime® y 1 presentaba reactivación de una lesión previa luego de seis meses de haber terminado el tratamiento. La mayoría de las lesiones, localizadas en las extremidades superiores, fueron características de Leishmaniasis cutánea. 5 de los 22 pacientes tuvieron diagnóstico negativo por frotis; mientras que por la amplificación del gen codificante para el 18S rRNA, se obtuvieron dos resultados negativos, detectándose la presencia del parásito en 19 muestras de sangre y en 20 de raspado. Con el ADN de las muestras positivas se amplificó, por PCR o qPCR, y luego secuenció el gen del citocromo b, obteniéndose el amplicón de interés para 3 muestras, 2 de raspado y 1 de sangre. Las secuencias obtenidas fueron analizadas y mediante Blast se identificó, con una identidad del 99% que las especies causantes de las lesiones en los pacientes eran L. guyanensis, L. shawi, y L. naiffi.
Descripción : Leishmaniasis is a parasitic disease caused by protozoa of the genus Leishmania, which manifests in its cutaneous, mucocutaneous or visceral form, according to the specie of the parasite. In Ecuador has been reported seven species, responsible of causing only the cutaneous and mucocutaneous forms: L. amazonensis, L. braziliensis, L. guyanensis, L. major like, L. mexicana, L. and L. panamensis naiffi. Various molecular techniques have been developed for the diagnosis and identification of the parasite, based on PCR and sequencing of different genes. In this research, Leishmania was identified up to the species level, in samples of patients infected with Leishmaniasis, by amplification of 18S rRNA gene and subsequent gene amplification and sequencing of cytochrome b gene. The study included 35 patients, recruited from Santo Domingo (n = 13), Pedro Vicente Maldonado (n = 11) and the “Hospital de Especialidades de las Fuerzas Armadas” (n = 11). Of the first 13 patients there was obtained only samples of the aspirate of the lesion, intended to culture, but the culture media were contaminated and were not analyzed. In the remaining 22 patients, two additional samples, scrapings of injury and peripheral blood, was collected. Of these patients, only five were women; nine had not started treatment with Glucantime®, and one had reactivation of a previous injury after six months of finalizing the treatment. Most ulcerated lesions, located in the upper limbs, were typical of cutaneous leishmaniasis. Five of the 22 patients had negative diagnosis by smear; while for amplification of the 18S rRNA gene, two negative results were obtained, detecting the presence of the parasite in 19 blood samples and 20 of scraping. With the DNA of the positive samples, the cytochrome b gene was amplified, by PCR or qPCR, and then sequenced, giving the amplicon of interest for three samples, two of scraping and one of blood. The resulting sequences were analyzed, and by Blast, with 99% of identity, it was found that the species causing the patients’ lesions were L. guyanensis, L. shawi, and L. naiffi.
URI : http://dspace.udla.edu.ec/handle/33000/4569
Aparece en las colecciones: Ingeniería en Biotecnología

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