Identificación de especies de Leishmania, a partir de muestras de pacientes infectados con leishmaniasis

Abstract

La Leishmaniasis es una parasitosis causada por protozoarios del género Leishmania, que se manifiesta en forma cutánea, mucocutánea o visceral, según la especie del parásito. En el Ecuador se han reportado siete especies causantes únicamente de las formas cutánea y mucocutánea L. amazonensis, L. braziliensis, L. guyanensis, L. major like, L. mexicana, L. naiffi y L. panamensis. Para el diagnóstico e identificación del parásito se han desarrollado varias técnicas moleculares basadas en la PCR y secuenciación de diferentes genes. En la presente investigación se identificó Leishmania a nivel de especie en muestras de pacientes infectados con Leishmaniasis, mediante la amplificación del gen codificante para el 18S rRNA y posterior amplificación y secuenciación del gen que codifica para el citocromo b. Se incluyó a 35 pacientes, reclutados en Santo Domingo n 13, Pedro Vicente Maldonado n 11 y el Hospital de Especialidades de las Fuerzas Armadas n 11. De los 13 primeros pacientes se obtuvieron únicamente muestras por aspirado de la lesión, destinadas a cultivo, pero estos presentaron contaminación y no fueron analizados por métodos moleculares. En los 22 pacientes restantes se recolectaron 2 muestras adicionales, una por raspado de la lesión y otra de sangre periférica. De estos pacientes, solo 5 fueron mujeres; 9 aún no habían empezado tratamiento con Glucantime y 1 presentaba reactivación de una lesión previa luego de seis meses de haber terminado el tratamiento. La mayoría de las lesiones, localizadas en las extremidades superiores, fueron características de Leishmaniasis cutánea. 5 de los 22 pacientes tuvieron diagnóstico negativo por frotis; mientras que por la amplificación del gen codificante para el 18S rRNA, se obtuvieron dos resultados negativos, detectándose la presencia del parásito en 19 muestras de sangre y en 20 de raspado. Con el ADN de las muestras positivas se amplificó, por PCR o qPCR, y luego secuenció el gen del citocromo b, obteniéndose el amplicón de interés para 3 muestras, 2 de raspado y 1 de sangre. Las secuencias obtenidas fueron analizadas y mediante Blast se identificó, con una identidad del 99 por ciento que las especies causantes de las lesiones en los pacientes eran L. guyanensis, L. shawi, y L. naiffi.