Clonación de genes para elaboración de controles positivos internos para la detección de enfermedades que afectan al sector agropecuario

Abstract

En este estudio se desarrollaron controles positivos para la validación del diagnóstico, por reacción en cadena de la polimerasa, de enfermedades causadas por Fusarium oxysporum f. sp. Cúbense raza 4 tropical y el virus PRRS. Se realizó análisis in silico de los cebadores utilizados para la amplificación del fragmento de interés y de la inserción del ADN en el vector recombinante pGEMT Easy de Promega, el cual fue utilizado para realizar la clonación. Se validó exitosamente un protocolo para la obtención de células competentes a partir de la cepa de Escherichia coli JM109 y mediante Ingeniería Genética se insertaron los fragmentos de interés para generar los controles positivos. No se encontraron cambios en la secuencia de ADN en relación al molde empleado. La eficiencia de los métodos y protocolos utilizados se comprobó por la similitud de resultados obtenida entre las pruebas “in silico” e “in vitro”. Los clones obtenidos fueron utilizados para la elaboración de un banco de células conservadas en solución de glicerol al 60 por ciento y almacenados a una temperatura de 80 Grados Centígrados Palabras clave: Ingeniería Genética, Fusarium oxysporum, PRRS, Escherichia coli JM109