Estandarización de un protocolo para la detección molecular de campylobacter fetus en toros reproductores

Abstract

Campylobacter es una bacteria patógena que coloniza el tracto genital de los bovinos, y es la causante de la Campylobacteriosis Genital Bovina (CGB), una enfermedad que ha causado grandes pérdidas económicas en el sector ganadero a nivel mundial. Esta enfermedades de transmisión sexual, y es producida por dos subespecies de Campylobacter fetus; Campylobacter fetus venerealis de transmisión estrictamente venérea y Campylobacter fetus fetus la cual forma parte de la flora intestinal. La transmisión del agente infeccioso se produce durante la cópula y también durante el proceso de inseminación artificial ya que es capaz de infectar al semen. En los toros esta enfermedad cursa de forma asintomática, por lo que genera serios problemas reproductivos en las hembras como: la infertilidad, los abortos esporádicos y repetición de celos. Desde los años ochenta, se han buscado métodos de diagnóstico de la Campylobacteriosis Genital Bovina que sean más específicos y reproducibles. Entre los métodos más utilizados están: la inmunofluorescencia directa, el ensayo por inmunoadsorción ligada a enzimas (ELISA), los polimorfismos en la longitud de fragmentos amplificados (AFLP), los cuales requieren de equipos costosos y de un mayor tiempo de análisis para determinar estas dos subespecies bacterianas. La reacción en cadena de la polimerasa (PCR), es un método que se basa en la amplificación ¨in vitro¨ de secuencias específicas de ADN. Este método es más rápido, sensible, específico y económico para la detección de Campylobacter. La presente investigación tiene la finalidad de estandarizar un método de detección molecular de Campylobacter fetus fetus. La estandarización de los parámetros se llevó a cabo variando las condiciones de la temperatura de hibridación, la concentración de cebadores y la concentración de en la reacción en cadena de la polimerasa múltiple. Adicionalmente, se compararon dos métodos de extracción del ADN genómico con el objetivo de seleccionar el método más rápido y económico. Palabras clave: Campylobacter fetus fetus, Campylobacteriosis, estandarización, reacción en cadena de la polimerasa múltiple.