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Tipo de material : bachelorThesis
Título : Clonación del gen alfa amilasa amyl de bacillus licheniformis atcc 14580 en escherichia coli mach1 t1
Autor : Vera Rodriguez, Lya Yosenka
Tutor : Granja Bastidas, María Gabriela
Palabras clave : BIOLOGÍA MOLECULAR;GENÉTICA;CLONACIÓN;ENZIMA
Fecha de publicación : 2020
Editorial : Quito: Universidad de las Américas, 2020
Citación : Vera, L. (2020). Clonación del gen alfa amilasa amyl de bacillus licheniformis atcc 14580 en escherichia coli mach1 t1 (Tesis de pregrado). Universidad de las Américas, Quito.
Resumen : La alfa amilasa de Bacillus licheniformis ATCC 14580 es una enzima monomérica y del tipo endo que se encarga de la catálisis de los enlaces glucosídicos internos dentro de las moléculas del almidón. Esta posee una estabilidad térmica elevada lo cual hace que tenga múltiples aplicaciones dentro de diferentes industrias. Sin embargo, los procedimientos actualmente existentes para la obtención de la misma han resultado ser poco eficientes. Por tal motivo, el presente trabajo de titulación tuvo como finalidad ejecutar la clonación del gen amyL correspondiente a la sección que codifica para la alfa amilasa madura empleando el sistema de expresión ChampionTM pET SUMO en Escherichia coli Mach1T1. Para lo cual en primer lugar se realizó un análisis in silico exhaustivo de la secuencia de interés, otorgando las pautas necesarias para efectuar la clonación in vitro. Del mismo modo, se evaluó la implementación de un protocolo de competencia celular y transformación mediante la utilización de un kit comercial. El crecimiento de las células de mantenimiento E. coli Mach1T1 fue lento y los resultados de la eficiencia de transformación empleando el vector control fue menor a la esperada. No obstante, se pudieron conseguir clones transformados con el fragmento de interés. A partir de esto, se pudo demostrar que el gen amyL que codifica para la alfa amilasa madura, se insertó en el casete del vector, dando origen al vector recombinante pET SUMO-amyL SPS.
Descripción : The alpha-amylase produced by Bacillus licheniformis ATCC 14580 is a monomeric endo-enzyme that catalyzes the hydrolysis of internal glycosidic bonds of starch molecules. Due to its high thermostability, this alpha-amylase has multiple applications in different industries. However, currently available methods for its obtention have a los efficiency. Hence, the aim of this thesis was to clone the amyL gene, encoding for mature alpha-amylase, using the ChampionTM pET SUMO expression system in Escherichia coli Mach1T1. To obtain proper in vitro cloning guidelines, an exhaustive in silico analysis of the target sequence was first performed. Besides, a competent cell preparation and transformation protocol through a commercial kit was tested. The growth of the cloning strain was slow and transformation efficiency with the control vector was lower than expected. Nevertheless, clones containing the target sequence were obtained. Therefore, the amyL gene encoding for mature alpha-amylase was successfully inserted in the vector cassette, generating the recombinant pET SUMO-amyL SPS vector.
URI : http://dspace.udla.edu.ec/handle/33000/12698
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