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Tipo de material : bachelorThesis
Título : Estandarización de una PCR múltiple para la identificación de tres patógenos en abejas del Ecuador
Autor : Maldonado Yaguana, Gerald Andrés
Tutor : Bastidas Caldés, Carlos Andrés
Palabras clave : TÉCNICAS DE LABORATORIO;REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA;PATOLOGÍA ANIMAL;ABEJAS
Fecha de publicación : 2018
Editorial : Quito: Universidad de las Américas, 2018
Citación : Maldonado Yaguana, G. A. (2018). Estandarización de una PCR múltiple para la identificación de tres patógenos en abejas del Ecuador (Tesis de pregrado). Universidad de las Américas, Quito.
Resumen : Las abejas son responsables de la polinización de muchas especies de plantas nativas y cultivadas. Estos insectos pueden ser afectados por hongos y bacterias los cuales pueden formar esporas que se dispersan fácilmente dentro de la colonia. Entre estas bacterias están Paenibacillus larvae y Melissococcus plutonius, agentes causantes de loque americano, loque europeo y el hongo Ascosphaera apis, causante de Ascosferosis. Estas enfermedades tienen alta prevalencia durante el estadio larvario de las abejas. La identificación y el diagnóstico de tales microorganismos mediante técnicas de microbiología y parasitología convencional se ven limitados, principalmente por el transporte, recolección y procesamiento incorrecto de muestras. En su lugar, las técnicas de biología molecular como la PCR, permiten obtener resultados en menor tiempo, con alta sensibilidad y especificidad. Por esta razón, se empleó un método molecular basado en la PCR múltiple para la identificación de estos microorganismos. Para la extracción de ADN a partir de larvas se utilizó un protocolo implementado con DNAzol. Se utilizaron cebadores específicos para la amplificación génica de los 3 microorganismos con bandas de 973 pb, 281 pb y 136 pb. Los resultados de la estandarización de la PCR multiplex mostraron una alta especificidad de los cebadores (100 por ciento) y un límite de detección de la PCR de 0.01 pg, con excepción de A. apis con 0.01 fg. Con estos resultados, se pudo demostrar la necesidad de disponer de un método molecular para la identificación temprana de estos patógenos causantes de las principales enfermedades que afectan a la apicultura del Ecuador.
Descripción : The pollination of native and cultivated plants is achieved by the interaction of bees, nevertheless these insects can be affected by fungi and bacteria. This type of infection is dispersed in the colony by spores. Bacterial diseases such as American and European foulbrood are caused by Paenibacillus larvae and Melissococcus plutonius respectively, and the fungus disease Ascospherosis is caused by Ascosphaera apis. These diseases have high prevalence during bees' larval stage. Microbiological and parasitological are limited techniques for identification and diagnosis of bacterial and fungus bees’ diseases due to the transport, collection and incorrect processing of samples. As an alternative, molecular biology techniques such as PCR has better results, because is more effective in time, sensitivity and specificity. Consequently, a molecular method based on multiple PCR was used to identify these microorganisms. A protocol implemented with DNAzol was used for the extraction of DNA from larvae. For the gene amplification of the 3 microorganisms with bands of 973 bp, 281 bp and 136 bp Specific primers were used. The results of the multiplex PCR standardization showed high specificity of the primers (100 percent) and a detection limit of 0.01 pg of the PCR, except for A. apis with 0.01 fg. The obtained results shown the need the need to have a molecular method for identification of pathogens that cause diseases that affect beekeeping in Ecuador.
URI : http://dspace.udla.edu.ec/handle/33000/8734
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