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Tipo de material : bachelorThesis
Título : Clonación de genes para elaboración de controles positivos internos para la detección de enfermedades que afectan al sector agropecuario
Autor : Báez Sotomayor, Juan David
Tutor : Granja Bastidas, María Gabriela
Palabras clave : CLONACIÓN MOLECULAR;CONTROL DE ENFERMEDADES;BACTERIA
Fecha de publicación : 2017
Editorial : Quito: Universidad de las Américas, 2017
Citación : Báez Sotomayor, J. D. (2017). Clonación de genes para elaboración de controles positivos internos para la detección de enfermedades que afectan el sector agropecuario (Tesis de pregrado). Universidad de las Américas, Quito.
Resumen : En este estudio se desarrollaron controles positivos para la validación del diagnóstico, por reacción en cadena de la polimerasa, de enfermedades causadas por Fusarium oxysporum f. sp. Cúbense raza 4 tropical y el virus PRRS. Se realizó análisis in silico de los cebadores utilizados para la amplificación del fragmento de interés y de la inserción del ADN en el vector recombinante pGEMT Easy de Promega, el cual fue utilizado para realizar la clonación. Se validó exitosamente un protocolo para la obtención de células competentes a partir de la cepa de Escherichia coli JM109 y mediante Ingeniería Genética se insertaron los fragmentos de interés para generar los controles positivos. No se encontraron cambios en la secuencia de ADN en relación al molde empleado. La eficiencia de los métodos y protocolos utilizados se comprobó por la similitud de resultados obtenida entre las pruebas “in silico” e “in vitro”. Los clones obtenidos fueron utilizados para la elaboración de un banco de células conservadas en solución de glicerol al 60 por ciento y almacenados a una temperatura de 80 Grados Centígrados Palabras clave: Ingeniería Genética, Fusarium oxysporum, PRRS, Escherichia coli JM109
Descripción : Positive controls for diagnose validation of diseases caused by tropical Fusarium oxysporum f. sp. cubense breed 4 and PPRS virus through polymerase chain reaction were developed. In silico analysis of the primers used for both the amplification and the insertion of the DNA fragment into Promega recombinant vector PGEMT Easy was carried. A protocol to obtain competent cells from the Escherichia coli JM109 strain was successfully validated, fragments of interest were introduced into them through genetic engineering generating the positive controls. There were no changes found in the used DNA template. Method and protocol efficiency was proven by the similarity of the results obtained in both the “in silico” and “in vitro” tests. The obtained clones were used to create a cell bank that will be kept in a 60 percent glycerol solution stored at 8 degrees Celsius Key words: Genetic engineering, Fusarium oxysporum, PRRS,Escherichia coli JM109
URI : http://dspace.udla.edu.ec/handle/33000/8042
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