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Tipo de material : bachelorThesis
Título : Análisis de la expresión de genes de defensa VSP2, LOX2, PR1 y PDF1.2 en arabidopsis thaliana (l) heynh, frente a diferentes concentraciones de calcio
Autor : Gutiérrez Ramírez, Daniela
Tutor : Rivas Romero, Fernando Xavier
Palabras clave : ANÁLISIS POR ACTIVACIÓN;BIOQUÍMICA VEGETAL;CONTROL BIOLÓGICO DE PLAGAS;PLAGAS AGRÍCOLAS
Fecha de publicación : 2017
Editorial : Quito: Universidad de las Américas, 2017
Citación : Gutiérrez Ramírez, D. (2017). Análisis de la expresión de genes de defensa vsp2, lox2, pr1 y pdf1.2 en arabidopsis thaliana (l) heynh, frente a diferentes concentraciones de calcio (Tesis de pregrado). Universidad de las Américas, Quito.
Resumen : La respuesta de defensa de las plantas frente a patógenos ocurre cuando se inicia el reconocimiento de moléculas efectoras de los patógenos, necrotróficos o biotróficos. Esto influye en la activación de la defensa de las plantas sea esta basal la cual es mediada por la PAMP o resistencia sistémica adquirida (SAR) que da a la planta una protección debido a una infección secundaria que esta ha sufrido. Arabidopsis thaliana es una planta modelo muy utilizada en técnicas moleculares. En el presente trabajo se analizaron los genes de defensa de las que influyen en las rutas del SA (PR1) y JA (LOX2, VSP2 y PDF1.2), para ello se cultivaron plantas de Arabidopsis thaliana ecotipo Col-0, con medio nutritivo Hoagland por siete semanas. Posteriormente se realizó un lavado con agua destilada por una semana y se les suministro los diferentes medios nutritivas (Murashigue & Skoog y Hoagland) con diferentes tratamientos (agua destilada, medio optimo, medio optimo sin calcio (-Ca), medio optimo con exceso de calcio (+Ca 5X). Se utilizaron 5 plantas de Arabidopsis para cada tratamiento, se recolectaron las plantas 24 horas y siete días después de aplicadas los tratamientos y se extrajo el RNA de toda la planta, se eliminó el DNA contaminante con la enzima Dnasa y el RNA se usó como molde para la síntesis de cDNA, posteriormente se usó como templado para la qPCR en tiempo real. El análisis de expresión génica se realizó aplicando el método de Livak. Se pudo determinar que los medios nutritivos MS y Hoagland inducen las rutas de defensa del SA y JA a las 24 horas de aplicada la dieta, pero siete días después existe un antagonismo entre los genes LOX2 y PR1 con los dos medios nutritivos. En el tratamiento con medio nutritivo MS (exceso de calcio), tuvo una mayor expresión en los genes LOX2 y PDF1.2 dependientes de la ruta del JA. Una deficiencia de calcio influye en la supresión de los genes de defensa. Finalmente se escogió la dieta MS para suministrarla al mutante coi1-21 el cual dio resultados favorables ya que se inhibió los genes de respuesta de la ruta de JA y se elevó el gen PR1 el cual es dependiente de la SAR.
Descripción : Plant response occurs when recognition of pathogen, necrotrophic or biotrophic effector molecules begins. This have influence activating plant defense, which can be basal defense mediated by PAMP or acquired systemic resistance (SAR), that gives the plant a protection to a secondary infection that it has been suffered. Arabidopsis thaliana is a model plant that is widely used in molecular techniques. In the present work, the defense genes of the SA (PR1) and JA (LOX2, VSP2 and PDF1.2) were analyzed. Arabidopsis thaliana Col-0 plants were cultured with Hoagland nutrient medium for seven weeks and then the plants were washed with distilled water for one week, then the culture mediums (Murashige & Skoog and Hoagland) were supplied with different treatments (distilled water, culture medium, culture medium without calcium, culture medium with excess of calcium (+Ca) 5X), The plants were collected 24 hours and seven days after the diets were applied, and the RNA was extracted from the whole plant. The contaminating DNA was removed with the enzyme Dnase and the RNA were used as a template for Cdna synthesis, subsequently used as a template for real time qPCR. Gene expression analysis was performed using the Livak method. It was determined that the nutritional media MS and Hoagland induce the defense pathways of SA and JA within 24 hours of diet, but seven days later there is an antagonism between the LOX2 and PR1 genes with the two nutrient media. In treatment with nutrient medium MS (excess calcium), it had a greater expression in the LOX2 and PDF1.2 genes dependent of the JA pathway. A calcium deficiency influences the suppression of the defense genes. Finally, the MS diet was chosen to supply coi1- 21 mutant which gave favorable results because it inhibits JA response genes and PR1 gene which is dependent of SAR was expressed.
URI : http://dspace.udla.edu.ec/handle/33000/7381
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