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Tipo de material : bachelorThesis
Título : Identificación de pseudomonas spp., causantes del “desorden del peridermo” (pink eye) en solanum tuberosum, en tres provincias del territorio ecuatoriano
Autor : Viteri Jaramillo, Analhí Diamela
Tutor : Tapia López, Wilson David
Palabras clave : BIOQUÍMICA;BIOLOGÍA MOLECULAR;ENFERMEDADES DE LAS PLANTAS;PAPA
Fecha de publicación : 2020
Editorial : Quito: Universidad de la Américas, 2020
Citación : Viteri, A. (2020). Identificación de pseudomonas spp., causantes del “desorden del peridermo” (pink eye) en solanum tuberosum, en tres provincias del territorio ecuatoriano (Tesis de pregrado). Universidad de las Américas, Quito.
Resumen : El desorden del peridermo, Pink eye o conjuntivitis de la papa, es una alteración conocida por producir un deterioro en el tubérculo en su estadio de precosecha, cosecha y postcosecha. La sintomatología visual que se presentó específicamente en las superficies de Solanum tuberosum, fue una coloración rosada en forma de manchas, pudrición extrema y áreas hinchadas o ásperas en la planta. La enfermedad ha sido relacionada con Pseudomonas fluorescens y Pseudomonas marginalis y poseen la capacidad de producir naturalmente sideróforos, conocidos como piocianinas y pioverdinas. La fluoresceína puede ser detectada bajo luz UV y natural. Bioquímicamente se caracterizaron por ser catalasa y oxidasa positiva y Gram negativas. Se realizó un muestreo basándose en sintomatología en las tres principales provincias productoras de papa del Ecuador; Pichincha, Carchi y Chimborazo. Posterior a ello, se cultivó las muestras en el medio selectivo de Pseudomonas; B King Agar. Mediante reconocimiento visual a través de luz UV, pruebas bioquímicas tradicionales y la tecnología BIOLOG, se seleccionó las bacterias de interés. Adicionalmente, se llevó a cabo la extracción del ADN de las bacterias mediante lisis térmica de las cepas puras. Para la amplificación se utilizaron las muestras con una absorbancia entre 300 a 1000 nanometro. Se empleó el primer universal 16S con sus cebadores 27F y 149R, adicionalmente, la enzima fue Taq polimerasa. Finalmente, se realizó un gel de 1.5 por ciento de agarosa en buffer TBEX al 0.5 por ciento e Invitrogen™ SYBR™ Safe™ DNA Gel Stain y se empleó el marcador molecular Low Mass Ladder de Invitrogen™. Los resultados positivos se mandaron a Macrogen para su secuenciación y las secuencias obtenidas, se las analizó mediante programas bioinformáticos y bases de datos; Geneious, Blast N y Mega. Los resultados conseguidos a partir de la amplificación, electroforesis y secuenciación de las cepas aisladas afirmaron la presencia de Pseudomonas fluorescens y Pseudomonas marginalis obteniendo 2 y 5 cepas respectivamente, específicamente en las muestras que presentaban sintomatología relacionadas con el desorden del peridermo, con mayor incidencia en la provincia de Carchi. Los postulados de Koch afirmaron la patogenicidad que producen las dos bacterias en tubérculos inoculados y mediante secuenciación se verificó nuevamente. Palabras claves: Solanum tuberosum, Pink eye, El Desorden del Peridermo, Pseudomonas fluorescens y Pseudomonas marginalis, Postulados de Koch.
Descripción : The periderm disorder, pink eye or potato conjunctivitis, is an alteration known to cause damage to the tube in its pre-harvest, harvest and post-harvest stage. The visual symptomatology specifically shows on the surfaces of Solanum tuberosum, a pink coloration in the form of spots, extreme rot and swollen or rough areas in the plant. The disease has been related to Pseudomonas fluorescens and Pseudomonas marginalis and affected the ability to naturally produce siderophores, known as pyocyanins and pyoverdins. Fluorescein can be detected under UV and natural light. Biochemically it is characterized by being catalase and oxidase positive and Gram negative. A determined sampling in symptomatology was performed in the three main potato producing provinces of Ecuador; Pichincha, Carchi and Chimborazo. Subsequently, the samples were cultured in the Pseudomonas selective medium; B King Agar. Through visual recognition b UV means of light, traditional biochemical tests and BIOLOG technology, selecting the bacteria of interest. In addition, the DNA extraction of the bacteria was carried out by thermal lysis of the pure strains. For amplification, samples with absorption between 300 to 1000 nm will be used. The first universal 16S with its primers 27F and 149R was used, in addition, the enzyme was Taq polymerase. Finally, a 1.5 porcent agarose gel was made in 0.5 porcent TBEX buffer and Invitrogen ™ SYBR ™ Safe ™ DNA Gel Stain and the Invitrogen ™ Low Mass Ladder molecular marker was used. The positive results were sent to Macrogen for sequencing and the sequences obtained were analyzed using bioinformatics programs and databases; Generous, Blast N and Mega. The results obtained from the amplification, electrophoresis and sequencing of the determined strains affirmed the presence of Pseudomonas fluorescens and Pseudomonas marginalis obtaining two and five strains respectively, specific in the samples that present symptomatology related to the periderm disorder, with greater incidence in the province of Carchi. Kochs postulates affirm the pathogenicity produced by the two bacteria in inoculated tubes and by sequencing they are verified again. Key words: Solanum tuberosum, Pink eye, the periderm disorder, Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas marginalis, Koch postulates.
URI : http://dspace.udla.edu.ec/handle/33000/12241
Aparece en las colecciones: Ingeniería en Biotecnología

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