Identificación de pseudomonas spp., causantes del “desorden del peridermo” (pink eye) en solanum tuberosum, en tres provincias del territorio ecuatoriano

Abstract

El desorden del peridermo, Pink eye o conjuntivitis de la papa, es una alteración conocida por producir un deterioro en el tubérculo en su estadio de precosecha, cosecha y postcosecha. La sintomatología visual que se presentó específicamente en las superficies de Solanum tuberosum, fue una coloración rosada en forma de manchas, pudrición extrema y áreas hinchadas o ásperas en la planta. La enfermedad ha sido relacionada con Pseudomonas fluorescens y Pseudomonas marginalis y poseen la capacidad de producir naturalmente sideróforos, conocidos como piocianinas y pioverdinas. La fluoresceína puede ser detectada bajo luz UV y natural. Bioquímicamente se caracterizaron por ser catalasa y oxidasa positiva y Gram negativas. Se realizó un muestreo basándose en sintomatología en las tres principales provincias productoras de papa del Ecuador; Pichincha, Carchi y Chimborazo. Posterior a ello, se cultivó las muestras en el medio selectivo de Pseudomonas; B King Agar. Mediante reconocimiento visual a través de luz UV, pruebas bioquímicas tradicionales y la tecnología BIOLOG, se seleccionó las bacterias de interés. Adicionalmente, se llevó a cabo la extracción del ADN de las bacterias mediante lisis térmica de las cepas puras. Para la amplificación se utilizaron las muestras con una absorbancia entre 300 a 1000 nanómetro. Se empleó el primer universal 16S con sus cebadores 27F y 149R, adicionalmente, la enzima fue Taq polimerasa. Finalmente, se realizó un gel de 1.5 por ciento de agarosa en buffer TBEX al 0.5 por ciento e Invitrogen TM SYBR TM, Safe TM DNA Gel Stain y se empleó el marcador molecular Low Mass Ladder de Invitrogen TM. Los resultados positivos se mandaron a Macrogen para su secuenciación y las secuencias obtenidas, se las analizó mediante programas bioinformáticos y bases de datos; Geneious, Blast N y Mega. Los resultados conseguidos a partir de la amplificación, electroforesis y secuenciación de las cepas aisladas afirmaron la presencia de Pseudomonas fluorescens y Pseudomonas marginalis obteniendo 2 y 5 cepas respectivamente, específicamente en las muestras que presentaban sintomatología relacionadas con el desorden del peridermo, con mayor incidencia en la provincia de Carchi. Los postulados de Koch afirmaron la patogenicidad que producen las dos bacterias en tubérculos inoculados y mediante secuenciación se verificó nuevamente.