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Tipo de material : bachelorThesis
Título : Producción de alfa-amilasa recombinante de Bacillus licheniformis ATCC 14580 en Escherichia coli BL21 (DE3)
Autor : Cevallos Bonifaz, Ana Cristina
Tutor : Granja Bastidas, María Gabriela
Palabras clave : BIOLOGÍA MOLECULAR;BIOTECNOLOGÍA
Fecha de publicación : 2019
Editorial : Quito: Universidad de las Américas, 2019
Citación : Cevallos Bonifaz, A. C. (2019). Producción de alfa-amilasa recombinante de Bacillus licheniformis ATCC 14580 en Escherichia coli BL21 (DE3) (Tesis de pregrado). Universidad de las Américas, Quito.
Resumen : La enzima alfa-amilasa es una de las más importantes endoamilasas industriales, cataliza la reacción de hidrólisis de las moléculas de almidón y las convierte en polímeros compuestos de unidades de glucosa y maltosa. Posee aplicaciones en las industrias de alimentos, textiles, papel, detergentes, farmaceútica, química, entre otras. En este estudio, la producción y expresión de la proteína recombinante alfa-amilasa amyL se realizó a partir de Bacillus licheniformis ATCC 14580 en células de expresión Escherichia coli BL21 (DE3) utilizando el vector pET SUMO. La eficiencia de transformación de las células de E.coli Mach1T1-pUC19 obtuvo un valor que resultó adecuado para llevar a cabo exitosamente el experimento desarrollado en este estudio. Adicionalmente, el sistema desarrollado de clonación y expresión del gen amyL empleando el vector pET SUMO en células de E. coli BL21 (DE3), fue capaz de producir satisfactoriamente la enzima alfa-amilasa mediante la inducción con IPTG. De la misma manera, el uso del promotor T7 favoreció la expresión de la enzima alfa-amilasa demostrando valores detectables de actividad enzimática y específica para la misma. Finalmente, la integridad de la enzima amyL se demostró mediante electroforesis en geles de poliacrilamida en los medios extracelulares precipitados con sulfato de amonio.
Descripción : The enzyme alpha-amylase is one of the most important industrial endoamylases, catalyzes the hydrolysis reaction of starch molecules and converts them into polymers composed of glucose and maltose units. It has applications in the industries of food, textiles, paper, detergents, pharmaceutical, chemical, among others. In this study, the production and expression of the amyL alpha-amylase recombinant protein was performed from Bacillus licheniformis ATCC 14580 in Escherichia coli BL21 (DE3) expression cells using the pET SUMO vector. The transformation efficiency of E.coli Mach1T1-pUC19 cells obtained a value that was adequate to successfully carry out the experiment developed in this study. Additionally, the developed cloning and expression system of the amyL gene using the pET SUMO vector in E. coli BL21 cells (DE3), was able to successfully produce the enzyme alpha-amylase by induction with IPTG. In the same way, the use of the T7 promoter favored the expression of the alpha-amylase enzyme demonstrating detectable values ​​of enzyme activity and specific for it. Finally, the integrity of the amyL enzyme was demonstrated by electrophoresis in polyacrylamide gels in the extracellular media precipitated with ammonium sulfate.
URI : http://dspace.udla.edu.ec/handle/33000/11451
Aparece en las colecciones: Ingeniería en Biotecnología

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