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Tipo de material : bachelorThesis
Título : Evaluación y optimización de variables significativas en el aislamiento de protoplastos a partir de hojas de Kalanchoe spp.
Autor : Torres Navarro, Gissela Dalith
Tutor : Rivas Romero, Fernando Xavier
Palabras clave : BIOTECNOLOGÍA VEGETAL;GENÉTICA VEGETAL;PROTOPLASTOS
Fecha de publicación : 2019
Editorial : Quito: Universidad de las Américas, 2019
Citación : Torres Navarro, G. D. (2019). Evaluación y optimización de variables significativas en el aislamiento de protoplastos a partir de hojas de Kalanchoe spp. (Tesis de pregrado). Universidad de las Américas, Quito.
Resumen : Uno de los componentes de la célula vegetal es la pared celular, esta estructura puede ser removida mediante métodos tanto mecánicos, como enzimáticos, dejando expuesta a la membrana celular; a estas células se las denomina protoplastos y pueden ser extraídos a partir de diferentes tipos de tejidos vegetales. Los protoplastos son empleados favorablemente en la inducción de variación somaclonal y en la micropropagación de plantas, aumentando la probabilidad de cultivos con diferencias genéticas positivas. El aislamiento de protoplastos es un tema de interés en el campo de la biotecnología vegetal, debido a sus diferentes aplicaciones investigativas. Actualmente, los protoplastos son la base de una extensa investigación científica sobre fisiología, morfología, bioquímica y genética de plantas, de ahí la importancia de aislar protoplastos de una manera óptima. Mediante el desarrollo de este trabajo, se identificó la influencia de las variables responsables de la degradación de la pared vegetal, empleando un diseño estadístico de Plackett-Burman, obteniendo como resultados la celulasa y el manitol como variables significativas. Para la optimización, se empleó un diseño central compuesto de dos factores. Como resultados se obtuvieron que la mejor concentración de celulasa es de 1,3% y manitol a 0,5 M con un promedio total de 5,6x104 protoplastos por mL de medio de aislamiento durante 3 h de incubación a 28 grados. Sin embargo, al reducir el tiempo de incubación a 1 hora manteniendo las mismas condiciones, se logró observar una mejora considerable de los resultados. Finalmente, se estableció un protocolo de aislamiento de protoplastos a partir de hojas de Kalanchoe spp., logrando mejores resultados, tanto en el conteo de protoplastos como en la viabilidad de los mismos, obteniendo un total de 6,05x104 p.mL-1 de medio inicial y hasta un 74,38% de protoplastos viables.
Descripción : One of the components of the plant cell is the cell wall, this structure can be removed by both mechanical and enzymatic methods, leaving exposed to the cell membrane; These cells are called protoplasts and can be extracted from different types of plant tissues. Protoplasts are favorably used in the induction of somaclonal variation and in the micropropagation of plants, increasing the probability of cultures with positive genetic differences. The isolation of protoplasts is a topic of interest in the field of plant biotechnology, due to its different research applications. Currently, protoplasts are the basis of extensive scientific research on physiology, morphology, biochemistry and genetics of plants, hence the importance of isolating protoplasts in an optimal way. Through the development of this work, the influence of the variables responsible for the degradation of the plant wall was identified, using a statistical design of Plackett-Burman, obtaining as a result cellulase and mannitol as significant variables. For optimization, a central design composed of two factors was used. As results, the best cellulase concentration was 1.3% and 0.5 M mannitol with a total average of 5.6x104 protoplasts per mL of isolation medium during 3 h of incubation at 28 degrees. However, by reducing the incubation time to 1 hour while maintaining the same conditions, it was possible to observe a considerable improvement in the results. Finally, a protocol for the isolation of protoplasts was established from Kalanchoe spp. Sheets, achieving better results, both in the count of protoplasts and their viability, obtaining a total of 6.05x104 p.mL-1. initial medium and up to 74.38% of viable protoplasts.
URI : http://dspace.udla.edu.ec/handle/33000/11450
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