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Tipo de material : bachelorThesis
Título : Regulación de la replicación del ADN en respuesta al estrés hipotérmico en saccharomyces cerevisiae
Autor : Mosquera Carrera, Pamela Mishell
Tutor : Cordero Arroyo, Andrea Pala
Palabras clave : GENÉTICA;BIOTECNOLOGÍA;ENZIMAS;FISIOLOGÍA CELULAR
Fecha de publicación : 2019
Editorial : Quito: Universidad de las Américas, 2019
Citación : Mosquera Carrera, P. M. (2019). Regulación de la replicación del ADN en respuesta al estrés hipotérmico en saccharomyces cerevisiae (Tesis de pregrado). Universidad de las Américas, Quito.
Resumen : Se han realizado varios estudios en cuanto al ciclo celular, muchos de ellos encaminados a comprender los mecanismos de regulación de la replicación y reparación del ADN. En este trabajo se utilizó a la levadura Saccharomyces cerevisiae como modelo para analizar la regulación de la replicación del ADN en respuesta al estrés hipotérmico. Se utilizaron diferentes cepas de S. cerevisiae que tienen deleciones en una o dos actividades enzimáticas de las rutas del checkpoint en la fase S del ciclo celular. Mediante el uso de técnicas microbiológicas se determinó el crecimiento de las diferentes cepas a 25°C y 4°C (drop test y curvas de crecimiento). Una vez establecido el tiempo de crecimiento de las diferentes cepas y su comportamiento a 4°C, se sincronizaron la cepa salvaje y las cepas mutantes con respecto a la fase S del ciclo celular para determinar si existían diferencias entre la replicación de ambas, se verificó el proceso mediante el análisis de muestras mediante citometría de flujo, medida de absorbancia a 600nm y monitoreo budding index. Posteriormente, se realizó electroforesis de campos pulsados (PFGE) con el fin de analizar el progreso de la replicación del ADN de la cepa salvaje y las mutantes dot1, hog1 y hog1 dot1; seguido de ello, se realizó Western Blot para observar la activación de Rad53, Hog1 y la metilación de la histona H3 a 25°C y 4°C. Los resultados obtenidos mostraron que la cepa salvaje es más sensible al estrés hipotérmico que la cepa dot1 (drop test). Así mismo, en la cepa salvaje se observó un paro en la replicación (PFGE). No se encontró activación de la proteína Rad53 a 4°C, contrario a la activación de Hog1 a la misma temperatura. Estos datos en conjunto sugieren que la respuesta al estrés hipotérmico está regulada por Hog1 y Dot1, independiente de la ruta dependiente de Rad53.
Descripción : Several studies have been carried out regarding the cell cycle, many of them aimed at understanding the mechanisms of regulation of DNA replication and repair. In this work, the yeast Saccharomyces cerevisiae was used as a model to analyze the regulation of DNA replication in response to hypothermic stress. Different strains of S. cerevisiae that have deletions in one or two enzymatic activities of the checkpoint routes in the S phase of the cell cycle were used. Through the use of microbiological techniques the growth of the different strains was determined at 25 ° C and 4 ° C (drop test and growth curves). Once established the growth time of the different strains and their behavior at 4 ° C, the wild strain and the mutant strains were synchronized with respect to the S phase of the cell cycle to determine if there were differences between the replication of both, it was verified the process by means of the analysis of samples by means of flow cytometry, measure of absorbance to 600nm and monitoring budding index. Subsequently, pulsed-field electrophoresis (PFGE) was performed in order to analyze the progress of DNA replication of the wild-type strain and the dot1Δ, hog1 and hog1 dot1 mutants; followed by a Western Blot to observe the activation of Rad53, Hog1 and methylation of histone H3 at 25 ° C and 4 ° C. The results obtained showed that the wild strain is more sensitive to hypothermic stress than the dot1 strain (drop test). Likewise, a stoppage in replication (PFGE) was observed in the wild strain. No activation of the Rad53 protein was found at 4 ° C, contrary to the activation of Hog1 at the same temperature. These data together suggest that the response to hypothermic stress is regulated by Hog1 and Dot1, independent of the Rad53-dependent pathway.
URI : http://dspace.udla.edu.ec/handle/33000/10915
Aparece en las colecciones: Ingeniería en Biotecnología

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